酶標(biāo)儀在臨床實(shí)驗(yàn)方面應(yīng)用廣泛,用于鑒別乙肝兩對(duì)半,HIV,鑒定DNA等許多方面,可以說(shuō)它是臨床及醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)*的基礎(chǔ)設(shè)備。
酶標(biāo)儀的常見(jiàn)故障及故障分析:
故障一:測(cè)量的結(jié)果重現(xiàn)性不好,即使用空板測(cè)量誤差也在允許的范圍之外。
故障分析:檢查試劑發(fā)現(xiàn)沒(méi)有問(wèn)題,檢查判定公式也沒(méi)有問(wèn)題,檢查光路也沒(méi)有污染。幾經(jīng)周折終于發(fā)現(xiàn)卡微板的卡簧在伸縮后沒(méi)有卡到位,造成微板在測(cè)量時(shí)在機(jī)內(nèi)晃動(dòng)影響測(cè)量結(jié)果不準(zhǔn)。
故障二:測(cè)量結(jié)果OD值偏低。
故障分析:排除完燈的能量值偏低后,檢查發(fā)現(xiàn)濾光片上有灰塵,用蒸餾水和擦鏡紙擦洗干凈晾干后故障排除。
測(cè)試方法:酶標(biāo)儀的儀器指標(biāo)在較佳狀態(tài),就儀器的精度測(cè)試和儀器的線性度介紹幾種測(cè)試方法。
精度測(cè)試:該過(guò)程可被用于檢測(cè)不同微板之間的測(cè)量精度。
使用新制備的在0.1% TWEEN20中的橘黃色甲基填充微孔,在每個(gè)微孔中使用不同稀釋度的溶劑以便獲得一個(gè)光密度范圍,首先確保每孔注入200mL液體,使用492nm慮光片測(cè)量至少3次,對(duì)每一微孔進(jìn)行下列計(jì)算:
(1)平均OD值;(2)較高和較低值;(3)平均值。較高和較低值之間的差值和百分比。讀數(shù)范圍在0.000到2.000Abs。同一孔平均值,較高值和較低值之間的差值應(yīng)該在+/一1.0%和+/一0.010OD范圍內(nèi)。
讀數(shù)范圍在2.000到3.000Abs同一孔平均值,較高和較低值之間的差值應(yīng)在+/一1.0% 和+/一0.005OD值范圍內(nèi)。讀數(shù)范圍在3.000Abs以上時(shí)準(zhǔn)確度不符合要求。
酶標(biāo)儀儀器線性度:儀器的線性度可使用一種溶劑的稀釋系列得到。如可在492 nIn處測(cè)量在0.1%TWEEN20中的橘黃色甲基的稀釋系列。
具體方法如下:在參考光密度計(jì)上測(cè)量被稀釋的溶劑,畫出OD值對(duì)已知濃度的點(diǎn)圖,并畫出通過(guò)這些點(diǎn)的較好的直線。將從系列稀釋中測(cè)得的吸光度值與該圖比較從而計(jì)算出各稀釋度的濃度。微板中每種稀釋度加入250t,-L,對(duì)每種稀釋至少使用兩個(gè)樣本,以便降低因加樣引起的誤差。 測(cè)量微板使用測(cè)量模式,利用測(cè)量得到的平均OD值和每個(gè)樣本的已知濃度畫一條OD濃度的曲線,從系列稀釋中測(cè)得的吸光值與該曲線比較從而計(jì)算出各稀釋度的濃度。
對(duì)光度記和本儀器,比較計(jì)算的濃度,不準(zhǔn)確度不應(yīng)大于以下,使用標(biāo)準(zhǔn)濾光片492nm時(shí)吸光度在0.000~2.000Abs+/一1%、2.000~3.000Abs+/一1.5%。使用梯度濾光片492nm時(shí),吸光度在0.000~2.500Abs+/一2%。